GFP精製クロマトグラフィーキット
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このキットは、pGLO バクテリア遺伝子組換えキットで発現させたGFPタンパク質をクロマトグラフィー法によって精製分離するキットです。各ステップでサンプルに紫外線を当てるとGFPタンパク質がカラムの中を移動して回収チューブに回収されるのがはっきりと目で確認できます。
クロマトグラフィー法は、さまざまな物質の化学的・物理的性質を利用して分離、精製する手法として確立されています。
例えば、細胞抽出液の中から目的のタンパク質や核酸等の生体物質を取り出してくることができます。また、環境中にどんな物質がどれだけ存在するかを調べたり、あるサンプルの中に含まれる微量な物質を検出する際にもクロマトグラフィーは応用されています。
このキットでは、GFPタンパク質が疎水性が強い性質を利用して分離を行いますが、その他にもクロマトグラフィーには分子の電荷を利用したイオン交換クロマトグラフィー、分子の大きさを利用したゲルろ過（サイズ排除）クロマトグラフィー等があり、いくつもの物質の混合物からたった１つの目的物質を得るためにこれらの手法を組み合わせることもよくあります。
Kit1 pGLO バクテリア遺伝子組換えキットとセットで使用することによりDNAを組み込んだ大腸菌が緑色蛍光を発するという性質を獲得し、その性質はDNAコードされているタンパク質が発現していることによる、ということをはっきりと認識することができるでしょう。
参考資料
講義・実験を含め、およそ50分授業５回分の内容になります。
※このキットは遺伝子組換え実験を含みますので、「遺伝子組換え生物等の使用等の規制による生
物の多様性の確保に関する法律」およびその関連規則・省令等に従う必要があります。詳細は
文部科学省ホームページをご参照ください。なお、実験系には旧「組換えDNA実験指針」別表７に
掲げられている実験系を用いています。
| GFP 精製クロマトグラフィーキット |
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キット構成内容※１
４人×８グループ分の実験試薬・器具が含まれています。
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アンピシリン（凍結乾燥）
※２ |
（L-）アラビノース（凍結乾燥）
※２ |
LB培地タブレット※２ |
| リゾチウム（凍結乾燥）※２ |
平衡化バッファー※２ |
結合バッファー※２ |
| 洗浄バッファー※２ |
TEバッファー※２ |
疎水クロマトグラフィーカラム ８本※２ |
| 15ml 滅菌済み培養チューブ 25本 |
5ml 回収用チューブ 25本 |
滅菌済みマイクロチューブ 30本 |
| 滅菌済み植付け用ループ 20本 |
滅菌済みディスポーザブルピペット 40本 |
マイクロチューブラック ８個 |
| 日本語マニュアルCD-ROM |
英文マニュアル（冊子） |
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※１ 2004年7月現在の構成内容です。予告なく変更する場合がございますのであらかじめご了承ください。
※２ お手元に届いた後、冷蔵保存をお願いいたします。
※３ キットに含まれる試薬等はあくまでも教材としてのもので、研究用ではありません。キット以外の系で使用された
場合の保証はいたしかねますのでご注意ください。
※４ このキットでは「Kit1 pGLOバクテリア遺伝子組換えキット」でGFPを発現させた大腸菌を再度培養し、培養し
た大腸菌からGFPを精製します。よってGFPおよび組換え大腸菌はキットに含まれません。ご注意ください。
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| キット以外に必要なもの |
| 電子レンジ |
ウォーターバス |
精製水 |
| クラッシュアイス、アイスボックス |
カラムラック |
小型遠心分離機 |
| オートクレーブ |
タイマー |
70％エタノール水溶液 |
| 油性マーカー |
ガスバーナー |
37℃インキュベーター |
| 長波長UVランプ |
UVゴーグル |
実験白衣 |
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